PCR儀使用核心注意事項概述

使用PCR儀時，需要遵循一系列操作和維護保養標準操作規程（SOP），以確保實驗的準確性和儀器的正常運行。以下是一些關鍵的注意事項：

一、實驗前準備

1、?環境要求

l 儀器應放置在水平、通風良好的臺面，兩側預留≥30cm散熱空間，遠離熱源、強磁場及腐蝕性物質。

l 室溫建議15-25℃，濕度10%-75% RH，避免溫濕度波動影響電子元件性能。

2、?耗材檢查

l 使用推薦規格的96孔板/8聯管，確保無變形、污染；光學封板膜需透明且密封性良好。

l 反應管與孔壁需緊密貼合（可旋轉即不合格），必要時用二氧化硅粉改善導熱。

二、操作流程規范

1、?反應體系配置

l 所有試劑在冰上操作，避免酶失活；設置陰性對照（NTC）和陽性對照。

l 加樣時避免氣泡，推薦使用多道移液器分裝后離心消除氣泡。

2、?程序設置

l 文件名按“項目代碼+日期"命名（如B070528-1），確保樣本編號與擴增孔位嚴格對應。

l 溫度程序需驗證：變性溫度95℃±0.5℃，退火溫度根據引物Tm值調整。

3、?運行監控?

l 運行中禁止開蓋，避免溫度波動導致擴增失敗。

l 實時觀察熒光信號變化，異常曲線（如平臺期波動）需立即終止程序。

三、儀器維護與保養要點

1. 日常清潔與維護

l 樣品槽清潔：實驗后用75%酒精擦拭樣品槽，去除殘留液體；若有試劑泄漏，需立即用去離子水沖洗并干燥。

l 光學模塊維護：熒光定量PCR儀的光學通道需定期用專用清潔布擦拭，避免指紋或灰塵影響檢測信號。

l 軟件與固件更新：關注儀器廠商，及時升級控制軟件以優化性能（如賽默飛QuantStudio系列可升級至自動化操作模式）。

2. 定期校準要求

l 溫度校準：建議每6個月校準一次加熱模塊，確保實際溫度與設定值偏差≤±0.5℃。

l 熒光檢測校準：使用標準熒光染料（如ROX參比染料）驗證熒光信號線性范圍，保證定量準確性。

四、常見問題處理

1、?溫度異常?：檢查溫控模塊或更換導熱硅脂。

2、?熒光信號漂移?：重新校準光學系統或更換濾光片。

3、?擴增效率低?：驗證引物特異性（熔解曲線單峰）和Mg2?濃度（1.5-2.5mM）。

綜上所述，PCR儀使用需嚴格遵循“防污染、控溫度、保均一、勤維護"原則，結合實驗需求選擇合適儀器型號（如32孔小型儀器適合快速檢測，96孔板儀器適合高通量實驗）。通過規范操作流程、定期校準維護及科學排查問題，可顯著提升實驗重復性和數據可靠性。?