人膀胱癌細胞說明書 返回列表頁

公司產品僅用于科研
產品名稱：人膀胱癌細胞
產品英文代號：5637
細胞培養條件：1640+10%FBS+1%P/S 
生長狀態：貼壁生長
產品規格：1×106
單位：T25/瓶
是否提供細胞STR鑒定：提供STR鑒定報告
保存培養溫度（℃）：37
運輸溫度（℃）：常溫
運費基數：活細胞包郵/凍存100-400元干冰費
穩定貨期（是or否）：     是

細胞培養及傳代：
<1>細胞培養
細胞請于細胞培養箱中培養，大部分細胞是37℃，5% CO2，濕度環境下培養的。有極少部分細胞培養條件不*，請仔細閱讀相應的細胞說明書，使用正確的培養基及培養條件；
細胞于培養瓶或皿中培養，加入適量說明書上標注的細胞相應*培養基（一般液面高度2-3mm即可）。
<2>細胞傳代（以下步驟適用于10cm皿）
細胞培養至密度達80%以上時即可傳代，先將細胞培養基取出3mL用15mL離心管裝好，其他培養基全部吸干舍棄；
培養皿加入2-3mL無菌PBS，輕輕晃動皿，使PBS浸洗到皿底所有部位，PBS吸干舍棄；
加入1mL胰酶，輕輕晃動皿，使胰酶浸沒到皿底所有部位，將皿蓋好放入培養箱中消化；
3min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞不再貼壁，即可加入*步收集的培養基混勻；
若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至不貼壁為止；
將細胞懸液均勻分成幾份，分別加入不同培養皿中，補加新培養基后放回培養箱培養。
<3>相關問題
部分細胞在傳代后時，會有以下現象：細胞內會有黑色小點、細胞間隙有些顆粒物、培養基漂浮一些死細胞或者細胞長的極慢。出現以上現象時，可以咨詢本公司技術人員此現象是否正常及相關處理方式，不要頻繁換液，大多數細胞1周換液2-3次即可。
細胞碎片較多、背景較臟時，貼壁細胞用PBS漂洗兩次、懸浮細胞打散后低速離心（900rpm，3min）能有效改善。
傳代比例建議1:2-1:3，長得比較快的細胞可以1：3，比較慢的按1:2傳代。傳代后，建議不要使用傳代前培養所使用的培養基，會有大量細胞碎片甚至導致細胞死亡的風險。
細胞狀態不好或者生長極慢的時候，可以通過增加血清濃度調整細胞狀態及生長速度。
請不要隨意更換培養基，因實驗需要，可以逐步馴化。
懸浮傳代：混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后，用*培養基重懸接種到新的培養皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗一次。

細胞凍存步驟： 
   待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
復蘇細胞步驟：    將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

細胞培養的優點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備 
記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；
適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經濟
可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象

大豆內標準lectin基因LAMP試劑盒
大豆內標準lectin基因PCR試劑盒
大豆內標準lectin基因染料法PCR試劑盒
大豆內標準lectin基因探針法PCR試劑盒
大麥內標準gamma-hordein基因LAMP試劑盒
大麥內標準gamma-hordein基因PCR試劑盒
大麥內標準gamma-hordein基因染料法PCR試劑盒
大麥內標準gamma-hordein基因探針法PCR試劑盒
大麥內標準HvPKABA1基因LAMP試劑盒
大麥內標準HvPKABA1基因PCR試劑盒
大麥內標準HvPKABA1基因染料法PCR試劑盒
大麥內標準HvPKABA1基因探針法PCR試劑盒
大麥內標準PKABA1基因LAMP試劑盒
大麥內標準PKABA1基因PCR試劑盒
大麥內標準PKABA1基因染料法PCR試劑盒
大麥內標準PKABA1基因探針法PCR試劑盒
番茄內標準Apx基因LAMP試劑盒
番茄內標準Apx基因PCR試劑盒
番茄內標準Apx基因染料法PCR試劑盒
番茄內標準Apx基因探針法PCR試劑盒
番茄內標準LAT52基因LAMP試劑盒
番茄內標準LAT52基因PCR試劑盒
番茄內標準LAT52基因染料法PCR試劑盒
番茄內標準LAT52基因探針法PCR試劑盒
馬鈴薯內標準UDP-葡萄糖焦磷酸酶基因LAMP試劑盒
馬鈴薯內標準UDP-葡萄糖焦磷酸酶基因PCR試劑盒
馬鈴薯內標準UDP-葡萄糖焦磷酸酶基因染料法PCR試劑盒

phospho-AKT1 (Tyr474) 英文名稱： 磷酸化蛋白激酶AKT1抗體  0.1ml
phospho-AKT1 (Ser473 + Tyr474) 英文名稱： 磷酸化蛋白激酶AKT1抗體  0.1ml
ASH1L 英文名稱： ASH1L蛋白抗體  0.2ml
ADRA2C 英文名稱： α2C-AR腎上腺素能受體抗體  0.2ml
AZI1 英文名稱： 中心體蛋白AZI1抗體  0.2ml
ALPK3 英文名稱： α蛋白激酶3抗體（心肌）  0.2ml
ALOXE3 英文名稱： 表皮型脂氧合酶3抗體（魚鱗病相關蛋白）  0.2ml
ANKRD28 英文名稱： 錨蛋白重復域28抗體  0.2ml
AFF4 英文名稱： 淋巴細胞相關AF4樣蛋白抗體  0.2ml
ANKRD12 英文名稱： 錨蛋白重復結構域蛋白12抗體  0.2ml
ANKRD13A 英文名稱： 錨蛋白重復結構域蛋白13A抗體  0.2ml
ANKRD9 英文名稱： 錨蛋白重復結構域蛋白9抗體  0.2ml
ANKS1A 英文名稱： 錨蛋白重復及SAM結構域蛋白1A抗體  0.2ml
APM2 英文名稱： 脂肪特定轉錄因子2抗體  0.2ml
APOL3 英文名稱： 載脂蛋白L3抗體  0.2ml
人膀胱癌細胞說明書ARMC3 (Cancer/testis antigen 81) 英文名稱： /抗原81抗體  0.2ml
ATXN7L2 英文名稱： 共濟失調蛋白7樣2抗體  0.2ml
ARS2 英文名稱： 耐藥蛋白ARS2抗體  0.2ml
ARSA 英文名稱： 芳香基硫酸酯酶1抗體  0.2ml
ASNA1 英文名稱：轉運三磷酸腺苷酶抗體  0.2ml
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100％，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d，繪制細胞生長曲線。