牛布氏桿菌（Brucella）ELISA檢測試劑盒

（本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫學診斷）

使用說明書

檢測原理

  試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被牛布氏桿菌捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗原，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中牛布氏桿菌（Brucella）的存在與否。

  樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

  自備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

  操作注意事項

1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。

2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3. 預處理后的樣本請按照操作步驟用*適當稀釋以達到

  試劑盒的的檢測效果。

4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成名稱 96孔配置 48孔配置 備注

微孔酶標板 12孔×8條 12孔×4條 無

陰性對照 0.5mL 0.5mL 無

陽性對照 0.5mL 0.5mL 無

檢測抗原-HRP 10mL 5mL 無

20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進行稀釋

* 6mL 3mL 無

底物A 6mL 3mL 無

底物B 6mL 3mL 無

終止液 6mL 3mL 無

封板膜 2張 2張 無

說明書 1份 1份 無

自封袋 1個 1個 無

7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

  結果判斷

1.  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；

陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

  試劑盒性能

1. 準確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；陰性對照孔OD值平均值≤0.15，說明試驗結果有效。

2. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

3. 重復性：板內、板間變異系數均小于15%。

4. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

5. 有效期：6個月

免責聲明

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。

2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。