【儀器心得】飛諾美色譜柱測定17種氨基酸

2025年03月21日 17:14

　　Phenomenex Gemini NX C18色譜柱測定17種氨基酸

　　實驗室沒有自動氨基酸分析儀，通過柱前衍生建立了HPLC測定種游離氨基酸。

　　1.儀器與試劑

　　氨基酸混合標準品，購自中國計量科學研究院，碳酸氫鈉，二硝基氟苯，磷酸二氫鉀，DMF(N,N-二甲基甲酰胺)，乙酸鈉均為分析純，乙腈為色譜級，超純水。Phenomenex Gemini NX C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)，液相色譜儀配置UV檢測器(LC-20AT)日本島津。

　　液相色譜條件。流動相：A為0.05 mol/L乙酸鈉(pH=6.4，含0.1% N,N-二甲基甲酰胺和10%乙腈)，B為乙腈:水(體積比為1:1)；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測波長：360 nm；進樣量：10 μL，梯度洗脫。梯度洗脫：0-8 min:(82%A)，8-14min(72%A)，14-34min(72%A)，34-35min(68%A)，35-40min(68%A)，40~41min

　　(40%A)，41-60min(5%A)，后面加一個平衡柱子的程序。

　　2.標準品處理

　　取混合標準溶液0.1 mL于10 mL容量瓶中，加入0.5 mL 0.5 mol/L NaHCO3溶液，調pH到8.5，加入0.5 mL 1%二硝基氟苯衍生化試劑，混勻后60 ℃恒溫水浴60 min，然后用0.1 mol/L KH2PO4試液定容至10 mL，上機檢測。植株樣品，稱取一定量的樣品，水回流提取0.5-1h,按照標準品步驟進行衍生，然后上機測定。

　　3.實驗結果：

　　采用柱前衍生法測定植株中的游離氨基酸，采用液相色譜法進行檢測，由圖1可知，各氨基酸對應的峰分離效果較好

　　圖1 游離氨基酸液相色譜圖,(1:天冬氨酸；2:谷氨酸；3:絲氨酸；4:甘氨酸；5:精氨酸；6:蘇氨酸；7:脯氨酸；8:谷氨酸；9:纈氨酸；10:甲硫氨酸；11:胱氨酸；12:異亮氨酸；13:亮氨酸；14:苯丙氨酸；15:組氨酸；16:賴氨酸；17:酪氨酸)

　　總結：使用Phenomenex Gemini NX C18色譜柱對于測定和分離17種游離氨基酸非常好用，沒有經費置辦氨基酸分析儀的可以選擇這種方法進行測定，色譜柱比較耐用，峰型分離比較好。

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