小鼠ELISA試劑盒的特異性如何驗證？

特異性指ELISA試劑盒準確識別目標分析物（如特定蛋白、激素），而不與樣本中其他結構相似物質（如同源分子、干擾物）發生交叉反應的能力。

驗證小鼠ELISA試劑盒的特異性需通過以下關鍵實驗和參數評估：

一、?交叉反應率測試?

檢測與靶蛋白結構相似的類似物（如小鼠IL-6試劑盒需驗證IL-1β、TNF-α等），交叉反應率應<10%。

例如：人生長激素(GH)試劑盒檢測小鼠GH時交叉反應率需≤1.17%。

二、標準品測試：

使用已知濃度的標準品進行測試，確保試劑盒能夠準確識別并定量目標蛋白。標準曲線應顯示良好的線性關系，且所有點都在預期范圍內。

三、天然樣本驗證：

在實際生物樣本（如小鼠血清、血漿或組織勻漿）中進行測試，確保試劑盒能在復雜背景中特異性識別目標蛋白，不受其他蛋白的干擾。

四、?抗體配對優化?

包被抗體與酶標抗體需針對靶蛋白不同表位，避免非特異性結合。

單克隆抗體混合包被可提升特異性（如Bethyl小鼠白蛋白試劑盒）。

五、?樣本基質干擾測試?

驗證高脂、高色素樣本的干擾率（如血清脂蛋白干擾需<5%）。

組織勻漿需通過離心或澄清劑去除色素干擾。

六、?質控報告審查?

優先選擇提供特異性驗證數據的品牌（如Invitrogen的板間精度、稀釋線性報告）。

通過這些步驟，可以全面評估小鼠ELISA試劑盒的特異性，確保其在研究中提供可靠的結果。