豬ELISA試劑盒的儀器該如何校準？

ELISA儀器校準依賴試劑盒自帶標準品和操作規范，目標是通過標準曲線驗證酶標儀的吸光度檢測精度，確保樣品濃度計算準確。校準需滿足：

標準品梯度稀釋后OD值呈線性關系（相關系數R2≥0.99）

空白孔調零后，各濃度標準品OD值落在試劑盒檢測范圍內（如IgA試劑盒12.5-400ng/ml）

一、關鍵校準步驟

1.標準品梯度稀釋與加樣

按試劑盒說明書稀釋標準品，生成5-7個濃度梯度（如倍比稀釋），確保覆蓋檢測范圍。以豬丙酮酸激酶(PK)試劑盒為例：

2.酶標儀參數設置與空白調零

波長校準：根據試劑盒要求設置檢測波長（通常450nm，部分需參比波長630nm）。

空白調零：以“標準品稀釋液”或“空白孔”調零，確保儀器基線穩定。

3.標準曲線繪制與驗證

檢測標準品OD值后，以濃度為橫坐標、OD值為縱坐標繪制標準曲線，優先采用四參數邏輯擬合。合格標準：

線性相關系數R2≥0.992

重復孔OD值變異系數（CV）≤15%6

二、校準注意事項與常見問題

溫育時間與溫度：嚴格控制37℃溫育（±1℃），避免因溫度波動導致酶活性變化。

洗滌步驟：使用30倍稀釋洗滌液，每孔加滿后靜置30秒，重復5次，確保無未結合物殘留。

濃試劑處理：濃縮洗滌液若有結晶，需37℃水浴溶解后稀釋，否則影響洗滌效果。