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一、交叉反應率要求
1、?類似物質檢測?
需驗證與目標分子結構相似的物質（如豬IgG與IgA）的交叉反應率，要求<5%?。
示例：非洲豬瘟抗體檢測需排除豬瘟病毒等其他病原體干擾?。
2、?陰陽性對照差異?
競爭法需確保陰陽性對照OD值差≥4.0，以排除非特異性結合?。
二、抗體配對優化
1、?雙抗體夾心法?
選擇針對不同表位的抗體對（如豬IL-6檢測），避免抗體間相互干擾。
包被抗體與酶標抗體需經親和純化，降低背景信號?。
2、?封閉劑選擇
使用5%脫脂奶粉或明膠封閉非特異性結合位點，減少假陽性?。
三、樣本基質控制
?溶血/脂血處理?：離心去除紅細胞或脂質，避免干擾（如豬C反應蛋白檢測）?。
?稀釋驗證?：高濃度樣本需稀釋至線性范圍內，確保結果特異性?。
四、方法學對比
?競爭法?：適用于小分子檢測（如激素），通過抑制率判斷特異性?。
?間接法?：檢測抗體時需驗證二抗的種屬交叉反應（如兔抗豬IgG）。
五、干擾實驗驗證
?步驟?：將重組蛋白抗原與檢測抗體混合后孵育，若標準曲線無線性，說明試劑盒特異性良好?。
通過上述標準可全面評估試劑盒的特異性，確保檢測準確性。?
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